الـ PCR الرقمي لـ EGFR T790M و C797S: تتبع المقاومة المتتالية بعد العلاج TKI

نظرة عامة

المقاومة للعلاج الموجه بواسطة EGFR تميل إلى الوصول في ترتيب متوقع، وهذا الاختبار مبني حول هذا التسلسل.بينما C797S يظهر بعد أن تم نشر عامل الجيل الثالث ضد T790Mاستهداف كل من البدائل في رد فعل حساس للغاية يحول انطباعا سريريا غامضا من التقدم إلى آلية الهروب المسماة.

كيف يعمل

يقوم الـ PCR الرقمي بتقسيم عينة واحدة جاهزة عبر الآلاف من الأقسام المستقلة قبل بدء التضخيم. كل قسم إما يحتوي على جزيء مستهدف أو لا،لذلك بعد الدورة الدورية الجهاز يحتسب المقصورات الإيجابية وتطبيق إحصاءات بويسون لاستنداد عدد جزيئات مطلقة دون الإشارة إلى منحنى قياسيأجهزة استكشاف محددة للأليل تميز تسلسل الطفرة من خلفية النوع البري الغنيةوالذي يهم لأن استنساخ الهروب غالبا ما يمثل جزءا صغيرا من المواد المتداولة في اللحظة تصبح التقدم مرئية سريريا.

مؤشرات

يتناسب هذا الاختبار مع المرضى الذين يتقدمون في العلاج الموجه إلى EGFR حيث يجب تسمية آلية الهروب قبل اختيار الخط التالي. البلازما هي المصفوفة المعتادة عندما يكون إعادة الخزعة غير عملي.ويمكن استخدام الأنسجة عندما تتوفر عينة جديدةكما أنها تدعم أخذ العينات المتسلسلة عبر المعالجة ، حيث يسمح العد المطلق بالمقارنة بين السحب بدلاً من صورة واحدة. نتيجة البلازما السلبية لا تستبعد المقاومة ،لأن التخلص يختلف، لذا فإن تأكيد الأنسجة لا يزال مناسباً عندما لا تتفق الصورة السريرية.

المواصفات والتقارير

تأكيد حجم الدم المطلوب، حد الكشف المعبّر عنه كجزء من الأليل المتغير، وعدد نسخ الحمض النووي التي تم استجوابها لكل رد فعل، حيث أن إدخال منخفض يقلل من الحساسية بصمت.يجب أن تعطي التقارير الحسابات المطلقة للمتحولات والأنواع البرية جنبا إلى جنب مع الكسر، وتسمية كل بديل بشكل منفصل، وتسجيل ما إذا كان المدخلات انخفضت دون الحد الأدنى المعتمد.

التخزين والمصادر

العمل بالبلازما يتحكم بالساعة الدم الذي يتم استخدامه في أنابيب EDTA القياسية يجب أن يصل إلى الفصل في خلال نافذة محددة قصيرة ،منذ تفكك الخلايا البيضاء تغمر العينة مع نوع البرية من الحمض النووي وتدفن الإشارةأنابيب استقرار الخلايا تمدد هذه النافذة وتستحق قيمتها عبر شبكات جمع متفرقة. يتم أرشفة البلازما المنفصلة مجمدة.الجداول الزمنية المكتوبة للشحنة والفواصل الموثقة من السحب إلى الفصل مهمة هنا أكثر من أي اختبار قائم على الأنسجة.

الأسئلة الشائعة

س: لماذا تختار الـ PCR الرقمية على لوحة تسلسل واسعة عندما يكون هناك شك في المقاومة؟عندما يكون السؤال هو ما إذا كان هناك بديل واحد معروف، يصل احتساب القسمات إلى حد اكتشاف أقل ويعود أسرع من التسلسل الواسع.اختر لوحة واسعة بدلا من ذلك عندما طريق الهروب غير معروف حقا.

س: ما الذي تعنيه نتائج C797S للخط التالي للعلاج؟يشير إلى أن الهروب قد حدث في موقع الارتباط الذي يستهدف من قبل مثبطات الجيل الثالث، لذلك استمرار نفس العامل من غير المرجح أن يساعد.يجب مناقشة النتيجة على أساس إرشادات العلاج الحالية بدلاً من التعامل معها كإرشادات وصفة طبية..

س: كم من السرعة يجب أن يصل البلازما إلى المختبر للحفاظ على الدورة الدورية للحمض النووي قابلة للاستخدام؟مع جمع EDTA القياسي ، يتم قياس فترة السحب إلى الفصل بالساعات ، وليس الأيام.تأكيد النافذة المعلنة من المزود وتحقق من صحة بريدك ضدها قبل إرسال مواقع التجميع إلى سير العمل.